11月8日消息，ChemRxiv预印本（DOI: 10.26434/chemrxiv.15011836/v1，2026年11月8日提交）报道，一项由质谱与糖蛋白分析研究者完成的系统研究，对高度糖基化的Fc融合蛋白依那西普（Etanercept，原研商品名Enbrel/恩利）的原研药与生物类似药进行了O-糖基化的多层次比较，第一作者Corentin Beaumal，通讯作者包括Jonathan Bones。

研究团队在Orbitrap Excedion Pro BioPharma质谱平台上采用正交LC-MS工作流：N-糖链与唾液酸去除后的完整质量分析、IdeS酶切后的middle-up分析，并结合O-糖蛋白酶（OgpA与IMPa）与EThcD碎裂完成位点特异性图谱。

核心发现：5批原研药、3款生物类似药（Erelzi、Benepali、Nepexto）与EDRM化学对照品均鉴定到相同的13个O-糖位点，糖型以唾液酸化core 1型O-糖链为主（唾液酸化率72%-80%），Tn抗原水平低；但Benepali与Nepexto的O-糖链占据数偏低（约每分子17.3条，原研与其余样品为18.9-19.1条），糖型分布也更宽；Bernepali（三星Bioepis版）的TNF结构域亮氨酸丢失高达35%，且亚基分析分辨了完整质量层面无法区分的亮氨酸丢失与双赖氨酸变体。

依那西普是自身免疫病领域的重磅TNF抑制剂，其致密且不均一的O-糖基化是生物相似性评价的公认难点。该工作提供的多层次工作流为O-糖基化生物治疗药物的位点特异性分析与可比性评估给出了可推广的路径，对生物类似药开发与监管申报中的质量表征具有直接参考价值。 （来源：ChemRxiv）